數(shù)字PCR可以直接計(jì)算目標(biāo)序列的拷貝數(shù),因此無(wú)需依賴于對(duì)照樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以進(jìn)行精確的絕對(duì)定量檢測(cè);此外,由于數(shù)字PCR在進(jìn)行結(jié)果判讀時(shí)僅判斷有/無(wú)兩種擴(kuò)增狀態(tài),因此也不需要檢測(cè)熒光信號(hào)與設(shè)定閾值線的交點(diǎn),完全不依賴于Ct值的鑒定,因此數(shù)字PCR的反應(yīng)受擴(kuò)增效率的影響大大降低,對(duì)PCR反應(yīng)抑制物的耐受能力大大提高;數(shù)字PCR實(shí)驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系分配的過(guò)程可以極大程度上降低與目標(biāo)序列有競(jìng)爭(zhēng)性作用的背景序列濃度,因此數(shù)字PCR技術(shù)也特別適合在復(fù)雜背景中檢測(cè)稀有突變。
微滴式數(shù)字PCR(Droplet Digital PCR, DDPCR)是第三代 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))技術(shù),是一種對(duì)核酸分子進(jìn)行絕對(duì)定量的方法。
DDPCR的原理是在PCR擴(kuò)增前對(duì)樣品進(jìn)行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬(wàn)個(gè)納升級(jí)的微滴,其中每個(gè)微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個(gè)至數(shù)個(gè)待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴(kuò)增后,逐個(gè)對(duì)每個(gè)微滴進(jìn)行檢測(cè),有熒光信號(hào)的微滴判讀為1,沒有熒光信號(hào)的微滴判讀為0,根據(jù)泊松分布原理及陽(yáng)性微滴的個(gè)數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。
在ddPCR中的微液滴產(chǎn)生中,ddPCR-DG7500油相可以直接和PCR擴(kuò)增試劑(包含待測(cè)的DNA樣品)注入到液滴合成芯片中,產(chǎn)生所需要尺寸的乳液滴微球。隨后,將獲得的乳液滴微球進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
ddPCR-DG7500油相是一種包含PFPE-PEG混合結(jié)構(gòu)的HFE7500油相溶液,可以直接用于ddPCR中的乳液微球產(chǎn)生,無(wú)需再進(jìn)行二次處理。該油相可以幫助用戶節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間,獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,同時(shí)把精力用于目標(biāo)產(chǎn)物上,不用擔(dān)心因油相質(zhì)量不穩(wěn)定而產(chǎn)生的不良目標(biāo)產(chǎn)物。
ddPCR-DG7500油相試劑是一種液體狀態(tài),提供1mL包裝和2mL包裝的兩種規(guī)格。
名稱:數(shù)字PCR油相7500試劑
型號(hào):ddPCR-DG7500
規(guī)格:液體狀態(tài),4℃環(huán)境保存,體積:1mL,EP管包裝,即開即用。